Protocolo Preliminar de Cultura de Fibroblastos Gengivais Humanos
July 8, 2012 / Categories: Digital Dentistry, Implant Dentistry
Magini, Ricardo de Souza
Simões, Claudia Maria Oliveira
Savi, Luciane Anita
Coura, Gustavo dos Santos
Zortéa Jr., Alberto João
Esse estudo teve como objetivos: estabelecer um protocolo, in vitro, de isolamento e cultivo primário de fibroblastos humanos derivados da gengiva inserida através de biópsia; estabelecer uma linhagem celular de fi broblastos humanos derivados da cavidade bucal; e avaliar a viabilidade celular desses fi broblastos humanos.
Uma biópsia de aproximadamente 20mm2 de gengiva ceratinizada (tecido conjuntivo e tecido epitelial) foi removida da região retromolar de um paciente e transportada em garrafa de cultura contendo o meio DMEM (Dulbecco´s modifi ed Eagle medium) suplementado com 10% de SFB (soro fetal bovino) e 1% de antibióticos. A biópsia gengival foi lavada com PBS (solução tamponada de fosfato) por três vezes, seccionada em 15 fragmentos menores que foram divididos em três garrafas de cultura contendo o mesmo meio de cultura (trocado duas vezes por semana). A proliferação e crescimento de fi broblastos foram verifi cados diariamente por microscopia invertida. Após subconfl uência de 70%, essas células foram desagregadas através do uso de tripsina a 0,25%, e novas subculturas foram realizadas em garrafas de cultura. Foram utilizadas células da sexta passagem. Para a avaliação da viabilidade celular, foi usado o teste de exclusão pelo corante azul de trypan. A viabilidade celular fi cou acima de 90%. Foi possível através do protocolo proposto, estabelecer uma linhagem celular de fi broblastos humanos derivados da gengiva inserida com viabilidade celular compatível com a literatura vigente. Esses resultados possibilitam o uso dessas em futuros experimentos.
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